快速绿FCF在成年小鼠和中型哺乳动物中作为可见胆管造影剂的广泛应用

利用快绿荧光对比剂（FG）对成年小鼠、犬和山羊的肝外胆管进行显影

首先，作者使用野生型成年小鼠进行渐进式FG胆管造影。将小鼠置于作者自行设计的胆囊造影台上（图1B），并在注射FG（1 mg/kg体重，静脉注射）后立即在体视显微镜下观察胆道系统。结果显示，注射FG后1-3分钟，肝总管和胆总管开始显影（图1B’），注射FG后10分钟，所有肝外胆管，包括胆囊和胆囊管，均可观察到FG显影（图1B’’）。这表明，在此条件下，即使在成年小鼠的肝外胆管中，FG也能清晰显影。

图 1.


一种使用 Fast Green FCF (FG) 对成年小鼠、犬和山羊进行胆管造影的新型方法。(A) 1 mg/ml FG 溶液置于 1.5 ml 试管中。(B) 异氟烷麻醉的小鼠在胆管造影过程中置于原胆囊造影架（白色虚线）上。(B’)（肝门部胆管的高倍放大图像）和 (B’’)（包含整个胆囊的低倍放大图像）显示了 FG 给药（1 mg/kg 体重）后 0、1、3、10 和 15 分钟时肝外胆管的蓝色对比图像。 (C) 在首次注射FG（0.5 mg/kg体重；静脉注射）后进行剖腹探查，去除覆盖肝外胆管的脂肪和结缔组织（模拟手术），并在再次注射FG（0.5 mg/kg体重，20分钟后）后拍摄胆管图像。箭头指示去除脂肪和结缔组织后可见的蓝色对比区域（白色箭头指示被FG标记胆管周围脂肪组织遮盖的未去除的肝外胆管区域）。(D) 通过颈外静脉注射FG（10 mg/kg体重），100分钟后实施安乐死。次日在解剖实践中进行尸检。山羊在通过颈外静脉注射FG（10 mg/kg体重）100分钟后实施安乐死，并在次日进行解剖实践。在经FG处理的山羊中，所有呈蓝色的肝外胆管部分清晰可见。上图插图为浸于白纸中的胆囊内胆汁。CBD：胆总管；GB：胆囊；HD：肝管；Li：肝脏。比例尺：(B’) 中为0.5 mm；(B’’) 中为1 mm。

接下来，作者对三种胆道疾病小鼠模型进行了FG胆管造影的比较研究（图2）：(i) 胆总管结扎 (BDL) 小鼠；(ii) 原因不明的胆囊萎缩的Mab21l1−/−小鼠²⁰（补充图S1）；以及 (iii) Sox17杂合子小鼠（Sox17^+/-和Shh-cre；Sox17^flox/−小鼠，两者均表现出胆囊壁发育不全^16–19）。

图 2.


荧光素胆管造影在胆管结扎 (A)、胆囊萎缩 (B) 和胆囊壁发育不全 (C, D) 小鼠胆道疾病模型中的应用。(A) 在胆管结扎 (BDL) 小鼠中，荧光素注射可显示肝外胆管管腔扩张（白色箭头，胆总管结扎部位）。(B) 两只 Mab21l1−/− 小鼠的胆囊自发萎缩，显示整个胆囊区域（左）或仅在近端区域（右）有荧光素标记。(C) 在胆囊壁发育不全的 Sox17+/− 小鼠中，荧光素对比剂可显示胆囊近端半部异位形成的胆管周围腺 (PBG)。(D) 在 Shh-cre;在胆囊壁发育不全的Sox17flox/−小鼠中，FG对比剂可清晰显示假定胆囊区域的细长管腔（白色箭头；蓝色虚线，管腔壁）。所有小鼠均自由采食，图中同时显示了假手术组和野生型对照组的图像。CBD：胆总管；GB：胆囊；HD：肝管；Li：肝脏。比例尺：A、B及C图左侧为1 mm；D图左侧为500 μm；C图和D图右侧为200 μm。

为了阐明每种基因型小鼠胆囊内的胆汁流入动力学，作者对禁食12小时的小鼠胆囊内的FG流入进行了视频分析（图3A）。 12小时禁食条件使作者能够校正野生型和突变型小鼠胆囊收缩程度的差异，并能轻松捕捉到充满胆汁的胆囊中FG标记的胆汁流动。所有野生型、Sox17^+/−和Mab21l1^−/−基因型的小鼠在禁食12小时后均表现出胆汁在胆囊中的积聚（图3B-D中最左侧的图），尽管Sox17^+/−小鼠的胆囊呈细长囊状¹⁷。在所有三种基因型中，FG均向胆囊顶端方向进入，并在FG流入后5分钟内充满整个胆囊腔（图3B-D）。即使在野生型小鼠中，FG标记胆囊至顶端所需的时间也因个体而异。该持续时间并不稳定（图 3B）。然而，在野生型和 Mab21l1−/− 小鼠中，新鲜 FG 标记的胆汁（蓝色）的初始流入与储存 12 小时的胆汁（黄色）形成清晰的边界（图 3C）。在 Sox17+/− 小鼠中，在另一方面，胆囊内储存的胆汁与FG的边界并不清晰，且FG在胆囊内迅速扩散（图3D）。

图3.


对禁食12小时的野生型、Mab21l1−/−和Sox17+/−小鼠胆囊内FG流入和扩散进行视频分析。(A) 给小鼠注射FG，禁食12小时，并在体视显微镜下记录FG进入胆囊的动力学过程。(B–D) 野生型(B)、Mab21l1+/−(C)和Sox17+/−(D)小鼠胆囊内FG流入的延时图像（0、1、2、5分钟）。右侧各插图（即 (B’)、(C’)、(D’)）显示了 FG 标记的新鲜胆汁（蓝色）与完全储存的胆汁（黄色）之间边界的放大图，边界由白色箭头指示（左图 FG 进入后 1 分钟）。FG 标记的新鲜胆汁流入导致野生型和 Mab21l1−/− 小鼠胆囊内胆汁与储存的胆汁形成双层分离，但在 Sox17+/− 小鼠中未观察到此现象。GB：胆囊。比例尺：1 mm。